Bibliothèque rapide d'ADN de construction de bibliothèque de GDSBio NGS plus le kit de préparation pour MGI

Description de produit

Bibliothèque rapide d'ADN plus le kit de préparation pour MGI

[Nom de produit]

Bibliothèque rapide d'ADN plus le kit de préparation pour MGI

[Chat. Non/Spec.]

Rxns KM004-A/24 ; Rxns KM004-B/96 ; rxns du sac 6 témoin

[Description de produit]

Visant la haut-sortie de MGI ordonnançant la plate-forme, ce kit fournit un plan de construction commode et universel de bibliothèque d'ADN dans un tube. Il combine la fragmentation, la réparation de fin et l'Un-produit de queue dans une étape, raccourcissant considérablement la période de la construction de bibliothèque et réduisant l'erreur provoquée par des étapes pénibles. Après fragmentation et préparation d'extrémité, le produit peut être directement ligaturé avec l'adaptateur sans purification supplémentaire, et la suite de la procédure est identique que celle du kit rapide de préparation de bibliothèque d'ADN #KM001 pour MGI. La quantification complète de bibliothèque peut être exécutée par la méthode de colorant fluorescent de dsDNA (par exemple, Qubit thermo Flex Fluorometer) ou l'ACP absolu de quantification après la dilution de la bibliothèque à une concentration appropriée.

[Type témoin]

Entrées recommandées du tableau 1 pour l'ADN commune

[Condition de stockage et durée de conservation]

Il devrait être stocké au tampon de ligature de -20°C. est normal pour que des cristaux précipitent tous les réactifs à de basses températures, il devraient être équilibrés à la température ambiante avant emploi. Le produit est valable 12 mois.

[Composants]

Le tampon de *FEP est le tampon de réaction de fragmentation et de préparation d'extrémité. Le mélange d'enzymes de FEP est un mélange d'enzyme lié à la fragmentation et à la préparation d'extrémité.

* s'il y a plus d'un échantillon, le mélange d'amorce de l'adaptateur #KM002 et #KM003 est recommandé. Ce kit fournit un ensemble d'amorces, l'ordre d'amorce est comme suit :

5' - TGTGAGCCAAGGAGTTG-3

5' - GAACGACATGGCTACGA-3

Note : perles recommandées de sélection : Perles de sélection Magbeads ou d'AMPure XP d'ADN de #NC1011 GDSPure.

[Notes]

1. Nous offrons deux types d'amorces universelles d'adaptateur réglées (adaptateur de GDS, #KM002 et #KM003, achetés séparément), mais les clients peuvent également choisir d'autres fabricants ou synthétiser leur propre adaptateur pour le MGI ordonnançant la plate-forme. Trop d'adaptateur mènera à la formation du dimère d'adaptateur, et l'adaptateur insuffisant mènera à la basse sortie de bibliothèque. Par conséquent, la concentration appropriée en adaptateur détermine la concentration et la qualité de la bibliothèque. Les concentrations recommandées en adaptateur pour différentes quantités d'entrée d'ADN sont montrées dans la table suivante :

Concentrations recommandées en utilisation du tableau 2 d'adaptateur

* exprimé comme le rapport de volume de l'adaptateur au diluant

2. L'enzyme utilisée dans le mélange principal d'ACP de la bibliothèque 2× DE HAUTE FIDÉLITÉ est un ADN polymérase de famille de B, qui a 5" - 3" polymérase et 3" - 5" des activités d'exonuclease, mais manque de 5" - 3" des activités d'exonuclease. Elle a la capacité viable de haute fidélité et homogénéité, et forte de synthèse. Le contrôle strict du nombre de cycles d'amplification est particulièrement important pour la sortie de bibliothèque. La table suivante montre le nombre recommandé de cycles d'amplification correspondant à différentes quantités d'entrée d'ADN :

Nombre recommandé du tableau 3 de cycles d'amplification correspondant à différentes entrées témoin

Note : 1. La table ci-dessus donne les résultats d'essai employant 150bp l'ADN standard, qui est pour la référence seulement.

2. Si des connecteurs inachevés sont utilisés, un nombre minimal de cycles (1-3) devrait être amplifié pour obtenir une bibliothèque complète.

3. Si la qualité de l'ADN d'entrée est pauvre, ou la sélection de format est effectuée pendant la construction de bibliothèque, le nombre de cycles d'amplification devrait être convenablement augmenté.

[Procédé standard de construction de bibliothèque]

Réparation de fragmentation et de fin

1. Déterminez la composition dissolvante de l'ADN de calibre, si aucun EDTA, procédez directement étape 2 ; Si l'EDTA est contenu, les perles 2.2× magnétiques devraient être employées pour la purification, ou un volume correspondant de tampon de neutralisation devrait être ajouté selon le contenu de l'EDTA dans la table suivante pour la neutralisation :

2. Préparez la réaction suivante dans un tube d'ACP de 200 μl :

3. Ajoutez 10 le mélange d'enzymes du μl FEP au système, au coup également, à la centrifugeuse ci-dessus brièvement, et immédiatement mis dans l'instrument d'ACP pour la réaction suivante :

Temps d'entreposage du tableau 4 requis pour obtenir des bibliothèques de différentes tailles

Ligature d'adaptateur

1. Procédez à la réaction de ligature dès que possible après fragmentation et préparation d'extrémité.

2. Diluez l'adaptateur selon le tableau 2.

3. Préparez le système de réaction suivant :

4. Vortex doucement et rotation vers le bas brièvement à mélanger bien, centrifuger brièvement et pour rassembler tout le liquide au fond du tube.

5. Exécutez la réaction suivante dans un cycler thermique :

Solution recommandée pour le nettoyage d'ACP/sélection de format (le volume magnétique spécifique de perle devrait être ajusté selon la dimension de l'échantillon réelle)

1. Préparez 100 produits de ligature de μl dans un tube à centrifuger approprié.

2. Ajoutez le μl 100 des perles magnétiques resuspendues de sélection d'ADN à l'échantillon. Doucement coup avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

3. Placez le tube sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant avec une pipette (ne jetez pas les perles).

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 4 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl (Tris-HCL, pH8.0-8.5 de 10mM) au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

8. Placez le tube sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être employée pour des expériences suivantes ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

Amplification de bibliothèque

1. Préparez la réaction suivante dans un tube d'ACP :

2. Vortex doucement et rotation vers le bas brièvement à mélanger bien, centrifuger brièvement et pour rassembler tout le liquide au fond du tube.

3. Exécutez la réaction suivante dans un cycler thermique :

Solution recommandée pour le nettoyage d'ACP/sélection de format (le volume magnétique spécifique de perle devrait être ajusté selon la dimension de l'échantillon réelle)

1. Préparez 50 produits de ligature de μl dans un tube à centrifuger approprié.

2. Ajoutez le μl 45 des perles magnétiques resuspendues de sélection d'ADN à l'échantillon. Doucement coup avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

3. Placez le tube sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant avec une pipette (ne jetez pas les perles).

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 4 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl (Tris-HCL, pH8.0-8.5 de 10mM) au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

8. Placez le tube sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être stockée à 2-8°C pendant 1-2 semaines ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

[Annexe] plan recommandé pour la sélection double face

Si la sélection double-ronde est exigée, nous fournissons le plan suivant pour choisir le volume magnétique approprié de perle selon la taille prévue de bibliothèque. La sélection de format peut être effectuée avant la réparation de fin ou après amplification. Une sélection deux ou double-plus ronds réduira considérablement le rendement de bibliothèque.

Remplissez volume de bibliothèque dans la table ci-dessous au μl 100. Choisissez le volume de perles magnétiques dans deux séries selon la taille prévue de bibliothèque. Et effectuez l'opération de sélection selon les instructions suivantes.

Quantité recommandée du tableau 5 de perles magnétiques pour la sélection Double-ronde

1. Remplissez volume de bibliothèque au μl 100 dans un tube de l'ACP 200μl et marqué comme A. Add un certain volume de perles magnétiques selon le tableau 5 (le rond 1) au coup d'A. Gently de tube avec une pipette pour 30 S. incubent des échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

2. Placez le tube A sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, enlevez soigneusement le surnageant sur un nouveau tube et marquez-le comme perles de B. Discard.

3. Ajoutez un certain volume de perles magnétiques selon le tableau 5 (le rond 2) au coup de B. Gently de tube avec une pipette pour 30 S. incubent des échantillons pour la minute 5 à la température ambiante. Placez le tube B sur le support magnétique. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant.

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube B tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 6 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube B est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube B du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

Note : Si la capture visée ne sera pas exécutée, ajoutez le tampon d'élution (Tris-HCL de 10mM, pH 8.0-8.5) pour l'élution. Autrement, l'eau ultrapure stérilisée devrait être employée pour l'élution.

• Tube B d'endroit sur le support magnétique. Surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube.

Pour l'usage de recherches seulement

GDSBio est une entreprise de pointe se concentrant sur la recherche et développement, la production et les ventes des produits de haute qualité des sciences de la vie. La société a un produit complet, avec la technologie d'ACP comme noyau, se concentrant sur l'ACP général, stockage quantitatif d'ACP de fluorescence, de NGS, électrophorèse acide nucléique et d'autres technologies de biologie moléculaire, et a développé les réactifs moléculaires de recherches, les matières premières diagnostiques in vitro moléculaires, les réactifs d'extraction acide nucléique et de détection et d'autres produits.