Sélection de format d'ADN de GDSPure de construction de bibliothèque de NGS et nettoyage Magbeads

Description de produit

Sélection Magbeads d'ADN de GDSPure
Chat. Non : NC1011, NC1012, NC1013
 
Composants

 
Stockage
Ce réactif devrait être maintenu à 2-8°C. Ne gelez pas. La durée de conservation est de 2 ans si non-ouverte.
 
Description
Perles superparamagnétiques performantes d'utilisation de Magbeads de sélection d'ADN de GDSPure et excellent rapport de tampon exactement pour épurer et choisir des fragments d'ADN à partir du point d'ébullition 150 au point d'ébullition 1000 ou même plus grand. Les nucléotides excédentaires, des sels, des enzymes et d'autres impuretés présentés dans l'opération de la construction de bibliothèque d'ADN seront éliminés après procédé de lavage simple, afin d'obtenir les fragments épurés, qui peuvent être directement employés dans des applications en aval telles que l'ordonnancement, l'hybridation, l'ACP et la digestion d'enzymes. La sélection Magbeads d'ADN de GDSPure peut être employée par des formats manuels et automatiques.
 
Application

Sélection de format et nettoyage pour l'ordonnancement de la deuxième génération (NGS), Sanger ordonnançant, qPCR, ddPCR et microarrays, etc.
 

Travaux préparatoires avant l'expérience

1. Solution de lavage : solution fraîche d'éthanol de 80% (v/v)

2. Solution d'éluant : l'eau ou TE Buffer sans nucléase

3. Vortex

4. Support magnétique

5. Afin d'assurer l'exactitude de la gamme de sélection, le volume témoin d'ADN devrait être μL du ≥ 50

6. Avant l'expérience, sortez les perles magnétiques du réfrigérateur et chauffez-les à la température ambiante pendant plus de 20 minutes avant emploi

Protocoles

Sélection de format des fragments d'ADN plus grands qu'une taille spécifique (sélection à simple face)

1. Préparez l'échantillon d'ADN de 50 μL dans un tube à centrifuger approprié.

2. Ajoutez un certain volume de la sélection resuspendue Magbeads d'ADN de GDSPure selon le 1er rapport d'addition de perle dans le tableau 1 à l'échantillon. Doucement coup avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

Par exemple, pour choisir tout le plus grand point d'ébullition que 250 de fragments dans l'échantillon, ajoutez la suspension magnétique de perle de 40 μL (0.80X).

3. Placez le tube sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant avec une pipette (ne jetez pas les perles).

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 4 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube du support magnétique. Éluez la cible d'ADN des perles dans l'eau ou TE Buffer sans nucléase du μl 30-40. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

8. Placez le tube sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), transférez le surnageant à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être employée pour des expériences suivantes ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

Sélection de format des fragments d'ADN dans des intervalles spécifiques de taille (sélection double face)

1. Préparez l'échantillon d'ADN de 50 μL dans un tube à centrifuger approprié et marquez-le comme A.

2. Ajoutez un certain volume de la sélection resuspendue Magbeads d'ADN de GDSPure selon le 1er rapport d'addition de perle dans le tableau 1 au coup d'A. Gently de tube avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

Par exemple, pour choisir le point d'ébullition environ 250 de fragments dans l'échantillon, ajoutez la suspension magnétique de perle de 40 μL (0.80X).

• Placez le tube A sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, enlevez soigneusement le surnageant sur un nouveau tube et marquez-le comme perles de B. Discard.

4. Ajoutez un certain volume de suspension magnétique de perle selon le 2ème rapport d'addition de perle dans le tableau 1 au coup de B. Gently de tube avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

Par exemple, pour choisir le point d'ébullition environ 250 de fragments dans l'échantillon, ajoutez la suspension magnétique de perle de 10 μL (0.20X).

5. Placez le tube B sur le support magnétique. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant.

6. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube B tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

7. Répétez l'étape 6 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

8. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

9. Enlevez le tube B du support magnétique. Éluez la cible d'ADN des perles dans l'eau ou TE Buffer sans nucléase du μl 30-40. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

10. Placez le tube B sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), transférez le surnageant à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être employée pour des expériences suivantes ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

Tableau 1 : Conditions recommandées pour la sélection de format

Notes

1. Veuillez lire l'instruction soigneusement avant qu'utiliser-et fonctionnent selon les instructions.

2. L'éthanol dans le tube à centrifuger devrait être éliminé aussi loin que possible avant l'élution pour assurer l'efficacité d'élution.

3. Le volume d'éluant peut être ajusté selon les conditions expérimentales, mais selon moins le μL de 20.

4. Les perles magnétiques devraient éviter des opérations de centrifugation, de congélation et autre. Avant emploi, la suspension de perles peut être entièrement mélangée par vortex et d'autres méthodes, et placé pendant plus de 20 minutes pour chauffer à la température ambiante.

5. Évitez le liquide accrochant sur la couverture de tube pendant le vortex et introduisant à la pipette l'opération pour réduire la perte d'ADN.
 
GDSBio est une entreprise high tech concentrée sur le développement, la production et le marketing des produits des sciences de la vie de qualité. La société a un produit complet, avec la technologie d'ACP comme noyau, se concentrant sur l'ACP ordinaire, construction de bibliothèque quantitative fluorescente d'ACP, de NGS, électrophorèse acide nucléique et d'autres technologies de biologie moléculaire, et a développé les réactifs moléculaires de recherches scientifiques, les matières premières diagnostiques in vitro moléculaires, les réactifs d'extraction acide nucléique et de détection et d'autres produits.