• Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN
  • Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN
Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN

Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN

Détails sur le produit:

Lieu d'origine: La Chine
Nom de marque: GDSBio
Certification: ISO9001, ISO13485
Numéro de modèle: K001S-A, K001S-B

Conditions de paiement et expédition:

Quantité de commande min: 1 kit
Détails d'emballage: le petit paquet ou le volume distribuent ou OEM
Délai de livraison: 8 jours de travail
Conditions de paiement: L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram
Capacité d'approvisionnement: 1000 kits par jour
meilleur prix Contact

Détail Infomation

Chat. Non.: K001S-A, K001S-B Spécifications: Rxns K001S-A/24 ; Rxns K001S-B/96 ; rxns du sac 6 témoin
Aspect: Complet, aucun dommages Courant: oui
Genre bibliothèque: ADN Ordonnancement de la plate-forme: Illumina
Logo Printing: Avec Logo Printing Paquet de transport: Emballage
Capacité de production: 1000 kits par jour Conditions de stockage: -20°C, avec une période de validité de 12 mois.
Surligner:

Tube d'échantillonnage jetable de virus de GDSBio

,

Tube d'échantillonnage jetable de virus de la classe I

,

Tube d'échantillonnage en nylon de virus de 100%

Description de produit

Kit rapide V2 de préparation de bibliothèque d'ADN

[Nom de produit]

Kit rapide V2 de préparation de bibliothèque d'ADN

[Chat. Non/Spec.]

Rxns K001S-A/24 ; Rxns K001S-B/96 ; rxns du sac 6 témoin

[Description de produit]

Visant la haut-sortie d'Illumina ordonnançant la plate-forme, ce kit fournit un plan de construction commode et universel de bibliothèque d'ADN dans un tube. Il combine la réparation et l'Un-produit de queue d'extrémité dans une étape, raccourcissant considérablement la période de la construction de bibliothèque et réduisant l'erreur provoquée par des étapes pénibles. La préparation d'extrémité, la ligature d'adaptateur, l'amplification et la purification de l'ADN bicaténaire réduite en fragments peuvent être exécutées dans environ 2 heures. La quantification complète de bibliothèque peut être exécutée par la méthode de colorant fluorescent de dsDNA (par exemple, Qubit thermo Flex Fluorometer) ou l'ACP absolu de quantification après la dilution de la bibliothèque à une concentration appropriée.

[Type témoin]

Application Type témoin Quantité recommandée
Ordonnancement entier de génome Génomes complexes de haute qualité 50ng-1μg
Ordonnancement de capture de cible de l'exome entier Génomes complexes de haute qualité 10ng-1μg
Ordonnancement de capture de cible du génome entier ADN DE LA FFPE ≥50ng
Ordonnancement de capture de cible du génome entier cfDNA/ctDNA ≥100pg
Ordonnancement entier de génome Génome microbien 1ng-1μg
Ordonnancement entier de génome (sans ACP) ADN de haute qualité

≥50ng (aucune sélection de format)

≥200ng (sélection de format)

Puce-Seq ADN de puce ≥100pg
Ordonnancement visé Amplicon ≥100pg

[Condition de stockage et durée de conservation]

Il devrait être stocké au tampon de ligature de -20°C. est normal pour que des cristaux précipitent tous les réactifs à de basses températures, il devraient être équilibrés à la température ambiante avant emploi. Le produit est valable 12 mois.

[Composants]

Composant 24 rxns 96 rxns
Réparation de fin et mélange d'enzymes d'Un-produit de queue μl 120 μl 2×240
Réparation de fin et tampon d'Un-produit de queue μl 240 μl 2×480
Ligase rapide d'ADN μl 120 μl 2×240
Tampon rapide de ligature μl 600 μl 4×600
Mélange principal d'ACP de la bibliothèque 2× DE HAUTE FIDÉLITÉ μl 600 μl 4×600
Amorce Mix* μl 120 μl 480

* s'il y a plus d'un échantillon, le mélange d'amorce de l'adaptateur #K002 et #K003 est recommandé. Ce kit fournit à un ensemble d'amorces l'index.

Note : perles recommandées de sélection : Perles de sélection Magbeads ou d'AMPure XP d'ADN de #NC1011 GDSPure.

[Notes]

1. Nous offrons deux types d'amorces universelles d'adaptateur réglées (adaptateur de GDS, #K002 et #K003, achetés séparément), mais les clients peuvent également choisir d'autres fabricants ou synthétiser leur propre adaptateur pour l'Illumina ordonnançant la plate-forme. Trop d'adaptateur mènera à la formation du dimère d'adaptateur, et l'adaptateur insuffisant mènera à la basse sortie de bibliothèque. Par conséquent, la concentration appropriée en adaptateur détermine la concentration et la qualité de la bibliothèque. Les concentrations recommandées en adaptateur pour différentes quantités d'entrée d'ADN sont montrées dans la table suivante :

Concentrations recommandées en utilisation du tableau 1 d'adaptateur

L'ADN a entré Conc. recommandée pour l'adaptateur Adaptateur : Taupe Ratio* d'insertion Degrés de dilution d'adaptateur de GDS
1μg 10μM 10:1 Aucune dilution
500ng 10μM 20:1 Aucune dilution
250ng 10μM 40:1 Aucune dilution
100ng 7.5μM 100:1 3:4
50ng 5μM 200:1 1:2
25ng 2.5μM 200:1 1:4
1ng 1μM 200:1 1h10

* adaptateur : Le rapport molaire d'insertion se rapporte au rapport du nombre molaire d'adaptateur d'autres sources au nombre molaire d'ADN d'entrée, qui peut être rudement calculé en se rapportant à la formule suivante :

Entrée ADN nombre (pmol) ≈Input ADN le masse) (de NG/[longueur de moyenne d'ADN 0.66×Input (point d'ébullition)]

qualité de *The et concentration de l'adaptateur considérablement affecter la sortie de la bibliothèque, particulièrement pour de basses bibliothèques d'entrée. L'adaptateur d'une source de haute qualité devrait être choisi et dilué à une concentration appropriée avec 0.1×TE avant ligature. Pour l'usage immédiat, assurez-vous que chaque addition témoin est des 5 fixes μl, évitez les erreurs d'addition témoin, et essayez d'éviter gel-dégel répété.

2. L'enzyme utilisée dans le mélange principal d'ACP de la bibliothèque 2× DE HAUTE FIDÉLITÉ est un ADN polymérase de famille de B, qui a 5" - 3" polymérase et 3" - 5" des activités d'exonuclease, mais manque de 5" - 3" des activités d'exonuclease. Elle a la capacité viable de haute fidélité et homogénéité, et forte de synthèse. Le contrôle strict du nombre de cycles d'amplification est particulièrement important pour la sortie de bibliothèque. La table suivante montre le nombre recommandé de cycles d'amplification correspondant à différentes quantités d'entrée d'ADN :

Nombre recommandé du tableau 2 de cycles d'amplification correspondant à différentes entrées témoin

ADN d'entrée Nombre recommandé de cycles d'amplification
bibliothèque 100ng bibliothèque 1μg
1μg 0 2-5
500ng 0 2-5
250ng 1-3 5-7
100ng 2-4 6-8
50ng 4-6 8-10
25ng 5-7 9-12
10ng 7-9 11-13
5ng 9-11 13-14
2.5ng 10-12 14-16
1ng 11-13 15-17

Note : 1. La table ci-dessus donne les résultats d'essai employant 150bp l'ADN standard, qui est pour la référence seulement.

2. Si des connecteurs inachevés sont utilisés, un nombre minimal de cycles (1-3) devrait être amplifié pour obtenir une bibliothèque complète.

3. Si la qualité de l'ADN d'entrée est pauvre, ou la sélection de format est effectuée pendant la construction de bibliothèque, le nombre de cycles d'amplification devrait être convenablement augmenté.

[Procédé standard de construction de bibliothèque]

Réparation de fin

Note : Si l'ADN réduite en fragments dépasse le μl 45 avant que cette étape, ou le tampon soit incompatible avec le tampon de réparation de fin, une purification magnétique de perle devrait être exécutée d'abord.

1. Préparez la réaction suivante dans un tube d'ACP de 200 μl :

Réactifs Volume
ADN réduite en fragments Variable
Réparation de fin et mélange d'enzymes d'Un-produit de queue μl 5
Réparation de fin et tampon d'Un-produit de queue μl 10
ddH2 O Au μl 65

2. Vortex doucement et rotation vers le bas brièvement à mélanger bien, centrifuger brièvement et pour rassembler tout le liquide au fond du tube.

3. Exécutez la réaction suivante dans un cycler thermique :

La température Temps
20°C 15min
65°C 15min
4°C

Ligature d'adaptateur

1. Procédez à la réaction de ligature dès que possible après préparation d'extrémité.

2. Diluez l'adaptateur selon le tableau 1.

3. Préparez le système de réaction suivant :

Réactifs Volume
Réparation de fin et produits d'Un-produit de queue μl 65
Tampon rapide de ligature μl 25
Ligase rapide d'ADN μl 5
Adaptateur X μl 5
Total μl 100

4. Vortex doucement et rotation vers le bas brièvement à mélanger bien, centrifuger brièvement et pour rassembler tout le liquide au fond du tube.

5. Exécutez la réaction suivante dans un cycler thermique :

La température Temps
20°C 15min
4°C

Solution recommandée pour le nettoyage d'ACP/sélection de format (le volume magnétique spécifique de perle devrait être ajusté selon la dimension de l'échantillon réelle)

1. Préparez 100 produits de ligature de μl dans un tube à centrifuger approprié.

2. Ajoutez le μl 100 des perles magnétiques resuspendues de sélection d'ADN à l'échantillon. Doucement coup avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

3. Placez le tube sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant avec une pipette (ne jetez pas les perles).

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 4 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl (Tris-HCL, pH8.0-8.5 de 10mM) au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

8. Placez le tube sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être employée pour des expériences suivantes ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

Amplification de bibliothèque

1. Préparez la réaction suivante dans un tube d'ACP de 200 μl :

Réactifs Volume
Produits de ligature après nettoyage ou sélection de format μl 20
Mélange principal d'ACP de la bibliothèque 2× DE HAUTE FIDÉLITÉ μl 25
Mélange d'amorce μl 5
Total μl 50

2. Vortex doucement et rotation vers le bas brièvement à mélanger bien, centrifuger brièvement et pour rassembler tout le liquide au fond du tube.

3. Exécutez la réaction suivante dans un cycler thermique :

La température Temps Nombre de cycle
95°C 3min 1
98°C 20sec

 

Nombre approprié choisi des cycles selon le tableau 2

60°C 15sec
72°C 30sec
72°C 5min 1
4°C -

Solution recommandée pour le nettoyage d'ACP/sélection de format (le volume magnétique spécifique de perle devrait être ajusté selon la dimension de l'échantillon réelle)

1. Préparez 50 produits de ligature de μl dans un tube à centrifuger approprié.

2. Ajoutez le μl 45 des perles magnétiques resuspendues de sélection d'ADN à l'échantillon. Doucement coup avec une pipette pendant 10 fois (ou vortex pour 30 s). Incubez les échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

3. Placez le tube sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant avec une pipette (ne jetez pas les perles).

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 4 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl (Tris-HCL, pH8.0-8.5 de 10mM) au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

8. Placez le tube sur le support magnétique. Après la minute 5 (ou quand la solution est claire), surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube. La sélection est accomplie, et l'ADN choisie peut être stockée à 2-8°C pendant 1-2 semaines ou être stockée pendant longtemps à -20°C.

[Annexe] plan recommandé pour la sélection double face

Si la sélection double-ronde est exigée, nous fournissons le plan suivant pour choisir le volume magnétique approprié de perle selon la taille prévue de bibliothèque. La sélection de format peut être effectuée avant la réparation de fin ou après amplification. Une sélection deux ou double-plus ronds réduira considérablement le rendement de bibliothèque.

Remplissez volume de bibliothèque dans la table ci-dessous au μl 100. Choisissez le volume de perles magnétiques dans deux séries selon la taille prévue de bibliothèque. Et effectuez l'opération de sélection selon les instructions suivantes.

Quantité recommandée du tableau 3 de perles magnétiques pour la sélection Double-ronde

Taille prévue de bibliothèque 150bp 200bp 250bp 300bp 400bp 500bp 600bp 700bp
Volume de perles (μl) Rond 1 100 90 80 70 60 55 50 45
Rond 2 30 20 20 20 20 15 15 15

1. Remplissez volume de bibliothèque au μl 100 dans un tube de l'ACP 200μl et marqué comme A. Add un certain volume de perles magnétiques selon le tableau 3 (le rond 1) au coup d'A. Gently de tube avec une pipette pour 30 S. incubent des échantillons pour la minute 5 à la température ambiante.

2. Placez le tube A sur un support magnétique approprié pour séparer les perles du surnageant. Quand la solution est claire, enlevez soigneusement le surnageant sur un nouveau tube et marquez-le comme perles de B. Discard.

3. Ajoutez un certain volume de perles magnétiques selon le tableau 3 (le rond 2) au coup de B. Gently de tube avec une pipette pour 30 S. incubent des échantillons pour la minute 5 à la température ambiante. Placez le tube B sur le support magnétique. Quand la solution est claire, soigneusement enlever et jeter le surnageant.

4. Ajoutez le μl 200 de l'éthanol nouvellement préparé de 80% au tube B tandis que dans le support magnétique. Incubez à la température ambiante pour 30 s, et soigneusement enlever alors et jeter le surnageant (ne touchez pas aux perles).

5. Répétez l'étape 6 une fois pour un total de deux lavages.

Note : Soyez sûr d'enlever tout le liquide évident après deuxième Washington.

6. L'air sèchent les perles jusqu'à ce que la surface des perles magnétiques n'ait aucun lustre évident tandis que le tube B est sur le support magnétique avec le couvercle ouvert.

Note : Faites non overdry les perles, ceci peut avoir comme conséquence la récupération inférieure de l'ADN. Quand les perles commencent à fendre, elles sont trop sèches.

7. Enlevez le tube B du support magnétique. Ajoutez le tampon d'élution de 22 μl au tube. Mélangez bien en introduisant à la pipette à travers au moins 10 fois ou sur un mélangeur de vortex pour 30 le S. incubent pour la minute 3-5 à la température ambiante.

Note : Si la capture visée ne sera pas exécutée, ajoutez le tampon d'élution (Tris-HCL de 10mM, pH 8.0-8.5) pour l'élution. Autrement, l'eau ultrapure stérilisée devrait être employée pour l'élution.

  • Tube B d'endroit sur le support magnétique. Surnageant de μl du transfert 20 à un nouveau tube.

 

Pour l'usage de recherches seulement

Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN 0

Vous voulez en savoir plus sur ce produit
Je suis intéressé à Kit rapide V2 K001S-A, K001S-B de préparation de bibliothèque d'ADN pourriez-vous m'envoyer plus de détails tels que le type, la taille, la quantité, le matériau, etc.
Merci!
Dans l'attente de votre réponse.